Jak działają zestawy ELISA

Metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem 1. Opakowanie: 0,05 MPH9. pakiet węglanowy jest buforowany w celu rozcieńczenia przeciwciała do zawartości białka od 1 do 10 µg/ml. Dodać 0,1 ml, 4 stopnie C przez noc, do otworów reakcyjnych każdej styropianowej płytki. Następnego dnia wylej roztwór do otworu i przemyj go 3 razy buforem płuczącym po 3 minuty za każdym razem.

(w skrócie przemywanie, to samo poniżej). 2. Dodaj próbkę: Dodaj odpowiednie rozcieńczenie badanej próbki 0,1 ml do wyżej-wspomnianego opakowanego otworu reakcyjnego, inkubuj przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni C. Następnie przemyj.

(W tym samym czasie wykonaj pusty otwór, otwór kontroli ujemnej i otwór kontroli dodatniej). 3. Dodaj przeciwciała-znakowane enzymem: Do każdego otworu reakcyjnego dodaj świeżo rozcieńczone przeciwciało-znakowane enzymem (rozcieńczenie po miareczkowaniu) 0,1 ml.

Inkubować 0,5 do 1 godziny w temperaturze 37 stopni C i przemyć.

4. Dodaj płynny substrat, kolorowy wyświetlacz: dodaj tymczasowy preparat roztworu substratu TMB 0,1 ml, 37 stopni C, 10 do 30 minut w każdym otworze reakcyjnym.

5. Zakończenie reakcji: dodać 0,05 ml 2M kwasu siarkowego do każdego otworu reakcyjnego. 6. Ustalenie wyników: można umieścić na białym tle, bezpośrednio gołym okiem, aby obserwować wyniki: im ciemniejszy kolor wewnątrz otworu reakcyjnego, tym silniejszy stopień dodatni, reakcja ujemna jest bezbarwna lub bardzo płytka, w zależności od odbicia koloru w głębi, do koloru

Zeskanowana wartość OD: na testerze ELISA, przy 450 nm (w przypadku oddawania barw BTS, to 410 nm), do zerowej ślepej dziury kontrolnej, pobranej w celu zmierzenia wartości OD każdego otworu, jeśli jest ona większa niż określona wartość OD kontroli ujemnej wynosząca 2,1 razy, czyli jest dodatnia.

Prawo pośrednie

1. Użyj opakowania do buforowania, aby rozcieńczyć znany antygen do 1 do 10 mg/ml na otwór plus 0,1 ml, 4 stopnie C przez noc;

2. Następnego dnia umyj się 3 razy;

3. Dodać określone rozcieńczenie próbki (nieznane przeciwciało) 0,1 ml do-wymienionego powyżej zapakowanego otworu reakcyjnego, inkubować przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni C, przemyć;

4. (zarówno próba ślepa, kontrola ujemna, jak i kontrola dodatnia) do otworu reakcyjnego dodać świeżo rozcieńczone drugie przeciwciało ze znacznikiem enzymatycznym (-przeciwciało) 0,1 ml;

5,37 st. C, inkubacja 35-60 minut, płukanie;

6.'Ostatni raz myjesz DDW. Pozostałe etapy są takie same, jak w przypadku „metody kanapkowej z podwójnym przeciwciałem” z punktów 4, 5, 6.